Für die Etablierung und Validierung jedes einzelnen Targets benötigen wir Angaben über die bei Ihnen genutzten Primersequenzen, die Größe der PCR-Produkte, sowie – sofern verfügbar - JAX Nummer und die DNA-Sequenz des Konstrukts. Letzteres ist nur in sehr seltenen, komplizierten Fällen erforderlich. Falls ein 3-Primer-System benutzt wird, ist die Information darüber sehr hilfreich, welcher davon der universelle Primer ist, der mit den jeweils anderen beiden stets an der PCR beteiligt ist. In unserem Target sample sheet, können alle geforderten Angaben eingetragen werden.

Weiterhin benötigen wir für die Validierung Referenzmaterial, um die Primer zu testen. Im Idealfall wären das eine heterozygote Probe (wt/mut) und eine homozygote (mut/mut). Letzteres geht natürlich nur für Transgene, deren Integrationsort ins Genom bekannt ist. Die Referenzproben sollten stets in gut gekennzeichneten, einzelnen 1,5 ml Reaktionsgefäßen versandt werden. Eine wt/wt-Referenz wird grundsätzlich nicht benötigt, da man dafür jede beliebige Probe nehmen kann.

Da wir einen DNA-Sequenzer für die Genotypisierung einsetzen, welcher mit Fluoreszenz-markierten Primern arbeitet, führen wir stets unser eigenes Primerdesign durch. Dabei sind wir auf eine Länge der PCR-Produkte im Bereich von 100 bp bis 500 bp limitiert. Meist können die originalen Primersequenzen des Kunden genommen werden, sofern die spezifischen PCR-Produkte nicht größer als 500 bp sind. Ansonsten müssen wir hier verschiedene Primervarianten an geeignetem Referenzmaterial ausprobieren.

Den Aufwand für das Primerdesign und die Validierung stellen wir nicht gesondert in Rechnung.

Sie können entweder Biopsiematerial, wie Schwanzspitzen, Ohrstanzen (eine Ohrstanze ist ausreichend) oder Probenmaterial auf Tupfern zusenden.

Fertig extrahierte DNA kann ebenfalls zugesandt werden. Dabei sollten aber nach Möglichkeit keine „quick-and-dirty“-Extraktionen genutzt werden, da diese nicht zwangsläufig mit der bei uns genutzten PCR-Chemie harmonieren müssen. Sind sie sich nicht sicher, kontaktieren sie die GVG Genetic Monitoring und lassen Ihr DNA-Extraktionsprotokoll prüfen. Wie empfehlen, ca. die Hälfte des DNA-Extraktes an uns zu senden, die andere Hälfte verbleibt bei Ihnen als Rückstellprobe.

Biologisches Material ist verderblich. Solches degradiert bekanntlich bei Raumtemperatur innerhalb weniger Stunden, wogegen es gekühlt über einen längeren Zeitraum gelagert werden kann, idealerweise im gefrorenen Zustand. Daher ist es wichtig, dass nach der Probennahme und für den Versand die Kühlkette nicht unterbrochen wird. Idealerweise erfolgt der Versand von Probenmaterial zu Beginn einer Woche. Damit wird sichergestellt, dass das Material nicht ungekühlt übers Wochenende gelagert wird.

Wir garantieren die Übermittlung der Untersuchungsergebnisse innerhalb von 10 Werktagen nach Probeneingang. Erfahrungsgemäß ist der Zeitraum aber wesentlich kürzer.

Im Gegensatz zu vielen Wettbewerbern, die lediglich die Ergebnisse der PCR übermitteln, führen wir die vollständige Genotypisierung durch und weisen darauf aufbauend der Probe den genauen Genotyp zu. Dies ermöglicht dem Kunden einen automatisierten Upload der Ergebnisse direkt in die in der Forschungseinrichtung etablierte Managementsoftware für die Zucht. Dies hebt unsere Dienstleistung deutlich vom Wettbewerb ab.

• die exakte Schreibweise der Mutationsbezeichnung (einschließlich Groß- und Kleinschreibung).
• die genaue Benennung der unterschiedlichen Allele (Wildtyp: wt oder +; Mutante: fl, mut, tg usw.).
• die Reihenfolge des Eintrags der Allele: Wildtyp zuerst oder die Mutante. Diese Reihenfolge muss für alle Testsysteme einheitlich sein.

Wir berechnen für die Kosten für die Genotypisierung einer Probe anhand der dabei zu analysierenden Targets. Hierfür spielt es keine Rolle, ob für den Nachweis lediglich ein Primerpaar benötigt wird, oder 3 bzw. 4 Primer (z.B. 2 Primer für den Wildtyp und 2 andere für die Mutante). Werden für eine Probe parallel zwei unterschiedliche, drei oder mehr Targets genotypisiert, so reduziert sich der Preis für das zweite Target und die nachfolgenden Targets.